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淀粉酶(AMS)測試盒說(shuō)明書(shū)
淀粉酶(AMS)測試盒說(shuō)明書(shū)
(碘-淀粉比色法)
一、測定原理:
淀粉酶能水解淀粉生成葡萄糖、麥芽糖及糊精,在底物濃度已知并且過(guò)量的情況下,加入碘液與未水解的淀粉結合生成藍色復合物,根據藍色的深淺可推算出水解的淀粉量,從而計算出AMS的活力。
二、試劑組成與配制:(100T/96樣)
1.試劑一:
0.4mg/ml底物緩沖液,60ml*1瓶,4℃避光保存6個(gè)月。
2.試劑二:
0.1mol/L碘貯備液,7ml*1瓶,4℃室溫保存6個(gè)月。
0.1mol/L碘應用液的配制
:按碘貯備液:雙蒸水=1:9稀釋?zhuān)F用現配4℃避光保存。
三、
操作表:
測定管
空白管
底物緩沖液(ml)37℃預溫5分鐘
0.5
0.5
待測樣本(ml)
0.1
混勻,37℃水浴,準確反應7.5分鐘
碘應用液(ml)
0.5
0.5
雙蒸水(ml)
3.0
3.1
混勻,波長(cháng)600nm,1cm光徑,雙蒸水調零,測各管吸光度。
注:不同樣本批量測試前需要做預實(shí)驗,確定最佳取樣濃度,將(空白OD-測定OD控制住0.05~0.150之間)
四、
計算公式與舉例:
1.血清(漿)計算舉例:
單位定義:
100ml血清(漿)中的AMS,在37℃與底物作用30分鐘,水解10mg淀粉為10個(gè)單位。
計算公式:
計算舉例:
取某人血清用生理鹽水10倍稀釋后取樣0.1ml作AMS測定,測定管OD0.308,空白管OD為0.383,則計算結果為:
2.組織中計算與舉例
單位定義:
組織中每毫克蛋白在37℃與底物作用30分鐘,水解10mg淀粉定義為1個(gè)淀粉酶活力單位。
計算公式:
計算舉例:
例1:
取1%大鼠肺勻漿0.1ml作AMS測定,測定管OD為0.275,空白管OD為0.383,1%大鼠肺勻漿的蛋白濃度為0.5677mgprot/ml,則計算結果為:
例2:
取2.5%魚(yú)腸勻漿0.1ml作作AMS測定,測定管OD為0.274,空白管OD為0.388,2.5%魚(yú)腸勻漿的蛋白濃度為0.5960mgprot/ml,則計算結果為:
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